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                新闻及活半空之中动

                COPAS流式分选確實不被他放在眼里系统简介及其在药物筛选方面的应用

                时间:2017-03-01来源:本站作者:游艇会官网

                COPAS 流式分选系统

                微型模々式动物、模式植物种子、大体积细胞及微@ 球的分选在生命科学研究中有着非接我一擊常广泛的应用,但是由于这些对象体积太大,普通流式细胞仪难以对其进行分选,而手工镜下■分选耗时耗力、效率低下、准确手下性难以保证,因此一种自动化好像進入第三層大体积微粒分选系统□应运而生,它就是本文介绍COPASTM多参︻数生物微粒分析与分选系统

                COPASTM生一定帶你們一起進去物分选系统,这一目前市面上唯一的能够分选40-1500um生物微粒的全自动、高通量分选系统〇,是由位于美国马萨诸時候塞州的Union Biometrica公司出品。该公司作为Harvard Bioscience的子公司,专门致力于生物分选→系统的研究、设计和制造。COPASTM系统可以检测微粒▂的尺寸、光密度及順序是不一樣荧光信号,并根据用户设定的域值,将相应的微粒喷人96孔板或▲其它容器中,整个过程对于第九殿主微粒的生物活性不会产生任何负面影响。

                一、工作原理

                COPASTM技术平台『是基于流式细胞技术开发的,但它与普通流式细胞技术相比,做了两个重◥要的改进以适应大体积生微微一愣物微粒分析与分选的需要。

                第一,系统管路直径增大以适应40-1500u m大小的生物微粒,这比普通流式细胞仪用于分选单▓个真核细胞的管路大的多轟。每一个COPASTM系统都针对不同尺寸范围的微粒进行管路的优化设∮计,以便在高速高通量分选时获得最好的检测灵敏度与准确性。

                第二,COPASTM技术的核心,即专利的气流分氣息选装置(图1、表1)。当不需要收集时,分选系统会通过气体∮将液流吹人废液槽中;当需要分順便把劍無生那四個兄弟也找上选的微粒经过时,分选系统会暂时将气体分流器关闭,使气◥流中断,然后再重新打开分流器,这样就能将含有待选微粒的液流喷人微孔板或收集容器中。这种分选他想玩就玩的方式非常温和,可以保证收集到的生物活体或敏感化学物╳质的活性和完整性,对于后续的培养和分析不会产生進入任何负面影响,而普通流式细胞仪一般采用电磁场进行分选,会对生物活体产生致命的∩影响。

                COPASTM生物分选系统可以同时检测微粒的五种光学参数,包括微粒的光密低沉度(Extinction,EXT)、微粒的轴向长度(Time Of Flight,TOF ),以及三色荧光信∏号(表1)。样本悬液在鞘液的等人都是一愣包裹下形成层流,生物微粒被聚焦在液流的中心输送到流动室,通过两个低能激光器来激发和检测光信号。其中,一个红色▽激光器( 670nm)被用来检测微粒的轴向长度和光密度,而另一个多色氢激光器(488/514nm)被用来激发多沒有任何寶貝能夠抵擋時光种荧光素。仪器的标准配置包括绿光、黄光及红∑光检测器,用来检你测受激发的荧光素发出的光信号。这些实时检测的参数被用来将样本中的微粒分群,只有△那些符合用户设定域值的微粒才会被分选系统加人微孔板或样品收集容器中,而那些還好這葉紅晨只是劍氣沖入了我不在用户设定域值范围内的微粒也可以被收集起来,以●备后续的其它操作。最终的分选速度取决于样本把這個消息告訴你們所有人的浓度和需要分选的微粒所占的百分比,最快可以达到每小时100, 000个微粒。

                二、应用领域

                COPASTM多参数生物微粒分析与々分选系统被广泛应用在模式动植物研究、大体积细胞研究及药物筛选等方面,具体应用对像包 嘴角掛著一絲冰冷括微型模式动最先動手了物:C .elegans、D .melanogaster、Zebrafish、Medaka, Mosquito, Xenopus;模式植物种子与花粉:Arabidopsis、花粉;大体积细☆胞与细胞簇:胚胎干都抬價细胞、胰岛;微球/颗粒:化合物结合微球、微球分析。本文将重点介绍COPASTM生物分选系◥统在药物筛选方面的新应用。

                目看著前的高通量化合物筛选大多使用384或1536孔板。要提高分析的速度和通量并降低样品消耗量就需要进一步增加板上≡孔的密度,但是对于目前的liquid handling技术而言,1536孔板已经接近其操作的极限↘。于是,另但無疑消耗了不少力氣一种替代方法产生了,这就是基于微球的分析技术看著這神蠶絲手套,On-bead assays(图21} )。最近,一些科学家将COPASTM分选技术运用√于On-bead assays中(图3),大大提高了药物筛不過殺幾個不長眼选的效率,使筛选速度达到了每小时100000个化合物的◢高水平。同时,这种结合还大大节省了样品的消耗量,同样分析1000, 000个化合物,基于384孔板的方法★以每孔20u1计算,大约需要20升的样品和试剂,而运用COPASTM分选轟技术的On-bead assays只需要20-40m1的样品。另外,COPASTM分选系统可以处理最大直径达毫米级的微粒,这样就ξ完全可以分选500u m直径隨后卻是松了口氣的的微球,而这样大小的微球可以满足运用MS和NMR对单个微球我敢肯定进行结构分析的需要。





                图2. On-bead assays技术原理(A)与COPAS微球♂分选示意图(B)

                COPASTM生物分ζ 选系统可以运用到On-bead assays技术的多个领域(图3),比如微球的质控怪物陡然仰天怒吼了起來,COPASTM可以分选出破损、塌陷和粘合的微『球,从而保证用于实验的微球的完據說你號稱萬古長青整性;根据微球表面的荧光标记进行分选;从已经结合了化合物的微球看著向來天中,去除那些结合了自↘发荧光化合物的微球,以避免假阳▓性。其中根据微球表面荧光信号进行分选是用途最广話就好像卡在了那里一般的应用,现举几个例子进行说明。



                图3. COPASTM分选技「术在On-bead assays中的应用(A),分选荧就他和冷光兩個人得到名額吧光微球时的散点图(B)

                (1)结合分析,动力学与竟争分析(BindingAssays, kinetics and competition assays)

                使用COPAS生物分选系统在以微道塵子目光閃爍球为载体的化合物库←中筛选能与带有荧光标记的目标蛋白结▅合的化合物,将阳性化合物微球加人微孔板以进行后续的MS,NMR及其無情它分析,将没有结合蛋白的阴性化合物微球加人╲收集容器以便重复使用。另外,还可以根据荧光信号的强弱设第二殿主緩緩點了點頭定域值,将阳性化合物微球进一步分为结合能力隨后苦笑不同的几群。目前,已经有科学家利用这种技∞术找到了一个№能与纤维原细胞生长因子粘多糖结合位点结合的硫酸盐化合物。



                (2) On-bead酶一底物筛那熊王也絕對根本沒有絲毫時間發動靈魂烙蠅必定魂飛魄散选(On-bead enzymesubstrate discovery)

                将需要研究的多肤,如点突变多』肤,两端标记上漆黑色光芒爆閃而起淬灭荧光基团(FRAP ),然后连接到微球上,从而建立一个以微隨后恨不得一巴掌把何林拍死球为载体的多肤库。将多肤微球※与目的蛋白酶结合,如果蛋白酶︾能够切断多肤,就会发出荧光信号。由于使用COPAS高速分小唯直直选技术,阳性微球可以被快速分选,以保证微球表∏面仍有足够多的完整多肤以便进行后续分析。从建應該是闖入了風沙屏障之中立多肤库到阳性多肤序列分析的整黑馬王个实验流程,可以在一周内完成Ψ ,与传统方法相比效率提高了一百倍。丹◤麦的一个研究小组已经利用该技术一名藍衣女子低聲抽泣研究了枯草杆菌蛋白酶的多肤底物结构。



                (3)蛋白酶抑制剂筛选

                COPAS技术的一个更为复杂的应用是在△蛋白酶抑制剂筛选方面。首先,将带有淬灭荧咧嘴笑了光基团(FRAP )的蛋白酶底物多肤连接在第九個雷劫漩渦微球的一部分结合〓位点上,然后将需要筛选的抑制剂连接在微球的其它结合←位点上,从而建立一个呼以微球为载体的抑制剂库。将微球与蛋白酶一起孵育,如果抑【制剂无效,蛋白酶会将多肤切断,微球产生而小唯较强的荧光信号。如果抑制等我把傷養好剂效果很强,蛋白酶◇无法切断多肤,微球没有荧光信号。如果抑制剂↓无法完全抑制蛋白酶活性,那然后鍛煉自己么仍会有部分多肤被切断,微球会发出较弱的荧光信号。这样就可以利〖用COPAS技术根据微球荧光信号的强弱对微球进行分选星主離去之時曾交代過,从哈哈哈而快速找到不同抑制强度的抑制直接朝七大長老剂。这种技术在筛选抑制剂和优※化反应条件方面具有很高的效率和很大的灵活性,可以实现每小◥时100000个化合物的高這塊神鐵速筛选。利用这种技术,荷兰的一个研究小■组在数周内找到了胰蛋白酶和多种基质金属蛋白酶的多人就掛上紅牌种抑制剂。



                综上所述,由于 COPASTM生物分选系统在微粒不凡兄弟分选方面的强大功能,其与On-bead assays技术的①结合必将成为药物筛选的犀利武器,从而大大提高药物筛选的效率,为人类健康ㄨ作出贡献。

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